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    SCID Beige
    该品系为 Prkdcscid 和 Lystbg 常染色体隐性突变同类系 (congenic) 小鼠，由 Croy 等在 Guelph 大学通过 C.B-17-Prkdcscid 和 C57BL/6-Lystbg 小鼠的杂交得到。该品系 B、T 淋巴细胞功能缺失，同时自然杀伤细胞 (NK细胞) 功能低下，SCID Beige 小鼠主要脏器重量除脾脏和胰腺减重外，其它内脏连续增加，年龄都会影响总胆固醇和高密度载脂胆固醇浓度。
    特征

    该突变基因小鼠血清中缺乏免疫球蛋白，其细胞在活体外对测试 B 或 T 细胞功能的免疫学实验不发生反应，在组织病理反面表现为淋巴组织重度淋巴细胞减少。

    用途

    应用于人类生理学、病理学、免疫学和血液病学等方面的研究。

    能接受人体正常组织的移植而成为一种嵌合体小鼠（即SCID-hu模型）进行人体免疫功能重建和肿瘤学方面的研究。

    生理生化数据

    品系周龄

    scid-beige (8 weeks)

    指标

    单位

    雄

    雌

    白细胞计数

    WBC (109/L)

    2.07±0.61

    1.06±0.32

    嗜中性粒细胞计数

    Neu (109/L)

    1.68±0.58

    0.75±0.28

    淋巴细胞计数

    Lym (109/L)

    0.07±0.08

    0.18±0.06

    单核细胞计数

    Mon (109/L)

    0.28±0.17

    0.09±0.11

    嗜酸性粒细胞计数

    Eos (109/L)

    0.03±0.02

    0.03±0.01

    嗜碱性粒细胞计数

    Bas (109/L)

    0.01±0.01

    0±0

    嗜中性粒细胞比例

    Neu (%)

    80.34±5.5

    69.04±7.43

    淋巴细胞比例

    Lym (%)

    3.78±3.9

    19.25±8.85

    单核细胞比例

    Mon (%)

    13.72±8.03

    7.98±6.31

    嗜酸性粒细胞比例

    Eos (%)

    1.67±1.03

    3.45±0.73

    嗜碱性粒细胞比例

    Bas (%)

    0.49±0.32

    0.28±0.22

    红细胞计数

    RBC (1012/L)

    10.11±0.4

    9.97±0.44

    血红蛋白浓度

    HGB (g/L)

    148±6.54

    142.1±4.68

    红细胞压积

    HCT (%)

    44.65±1.76

    43.73±1.44

    平均红细胞体积

    MCV (fL)

    44.17±1.15

    43.87±1.06

    平均红细胞血红蛋白含量

    MCH (pg)

    14.65±0.45

    14.27±0.64

    平均红细胞血红蛋白浓度

    MCHC (g/L)

    331.64±3.34

    325.4±11.69

    红细胞分布宽度变异系数

    RDW-CV (%)

    13.01±0.46

    13.14±0.3

    红细胞分布宽度标准差

    RDW-SD (fL)

    24.59±0.79

    25.04±0.44

    血小板计数

    PLT (109/L)

    1086.73±143.37

    1104.4±138.23

    平均血小板体积

    MPV (fL)

    4.97±0.18

    4.77±0.13

    血小板体积分布宽度

    PDW

    15.42±0.11

    15.32±0.12

    血小板压积

    PCT (%)

    0.54±0.08

    0.53±0.07

     

    品系周龄

    SCID-beige (8 weeks)

    指标

    单位

    雄

    雌

    谷丙转氨酶

    ALT

    U/L

    43.81±18.22

    32.27±5.3

    谷草转氨酶

    AST

    U/L

    152.4±70.82

    124.15±24.39

    血清钙

    Ca

    mmol/L

    1.57±0.11

    1.85±0.09

    血清磷

    P

    mmol/L

    1.77±0.25

    2.05±0.24

    血糖

    Glu-G

    mmol/L

    3.02±0.65

    4.82±1.47

    碱性磷酸酶

    ALP

    U/L

    61.1±11.38

    84.75±7.08

    γ-谷氨酰转肽酶

    γ-GT

    U/L

    0.62±0.79

    0.08±0.14

    血清总蛋白

    TP

    g/L

    46.39±2.17

    45.63±2.9

    α-淀粉酶

    α-AMY

    U/L

    1566.39±213.63

    1828.99±196.99

    血清甘油三酯

    TG

    mmol/L

    2.49±0.68

    1.4±0.26

    胆固醇

    TC

    mmol/L

    2.55±0.25

    1.59±0.22

    肌酸激酶

    CK

    U/L

    381.54±119.22

    538.23±162.75

    乳酸脱氢酶

    LDH

    U/L

    734.29±143.7

    568.45±129.36

    血清白蛋白

    ALB Ⅱ

    g/L

    26.1±1.64

    27.94±2.15

    脂肪酶

    LIP

    U/L

    24.57±8.2

    31.06±7.63

    尿素氮

    UREA

    mmol/L

    4.35±0.67

    4.52±0.5

    血清镁

    Mg Ⅱ

    mmol/L

    0.93±0.04

    0.92±0.06
    基因鉴定报告：
    • 样本信息和目的：
    • 样本：
      SCID Beige小鼠
    • 目的：
      确认SCID Beige小鼠基因修饰类型
    • 靶基因：
      Prkdc Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide
    • NCBI号：
      19090
    • NCBI链接：
      https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/19090
    • 靶基因2：
      Lyst lysosomal trafficking regulator
    • Gene ID：
      17101
    • NCBI链接：
      https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/17101
    方法和结果
     
    PRKDC（Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide，DNA 依赖性蛋白激酶，又名 scid）能识别和传递DNA 断裂损伤信号，当细胞 DNA 发生断裂损伤后，PRKDC 复合物就聚合在损伤位点上，随之蛋白激酶被活化，募集并磷酸化其下游的 DNA 修复蛋白启动DNA断裂修复。此外，PRKDC 在维持端粒稳定性，免疫蛋白质的位置特异性重组中也发挥重要的作用。Prkdc 基因位于小鼠 16 号染色体上，有 87 个外显子。
     
    由之前的 NOD-SCID 小鼠鉴定报告（SPF2020102001ZJY）发现：SCID 系列小鼠的基因突变类型为 Prkdc 基因85号外显子发生单核苷酸改变（T突变为A）后，提前引入终止密码子，导致蛋白翻译提前终止。碱基突变后PRKDC蛋白预测将截短83个氨基酸。我们使用该报告（SPF2020102001ZJY）中的鉴定引物（Prkdc-ex85-F：5'-TATGTGGACTTCTTCTCACC-3' Prkdc-ex85-R: 5'-GGTAAAGCCGCCCTAAGAGT-3'，产物长度：454 bp ）、以 6 个 SCID Beige（BG）小鼠的鼠尾基因组为模板进行PCR扩增，电泳结果如下：
     
    每两个 PCR 产物混合并进行 Sanger 测序结果，结果显示（图 3 ）：6 只 BG 小鼠的均为 Prkdc 基因 85 号外显 子单核苷酸改变（T 突变为 A），即为 SCID 基因突变。
     
     
    Lyst（lysosomal trafficking regulator，溶酶体转运调节因子；又名 Beige）是一种蛋白质编码基因，并可能参与色素沉着。Lyst 基因突变可能与 Chediak-Higashi综合征（CHS）相关。Lyst 基因位于 13 号染色体上，有 55 个外显子（图 4）。
     
    但 Lyst 基因转录本201（http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Exons?db=core; g=ENSMUSG00000019726; r=13:13590397-13778803;t=ENSMUST00000110559）仅显示 53 个外显子（图 5）。文献报道显示，BG 小鼠的 Lyst 基因突变是“外显子 54 中 3bp 缺失的结果，导致该蛋白羧基末端附近的 3741 位密码子处异亮氨酸缺失”，在转录本 201 中比对显示基因突变位置位于 Lyst 基因外显子 52 上。针对Lyst基因外显子52 和53 设计引物：bg-Ex52-F:5’-TGCAGTAGGTTATCCTGGCA-3’,bg-Ex52-R:5’-GAAGCCTTCACACCTGCATTC-3’（扩增长度303bp）; bg-ex53-1F:5’-CAGTCTGCTGGCCGTCTTTT-3’,bg-ex53-1R:5’-TGGGTGTGCTGAGTATAGGG-3’（扩增长度 631bp），并进行 PCR 扩增和测序（图6）。比对结果显示，Lyst 基因外显子52 有 3bp 缺失（CAT），导致该蛋白 3740 位和 3741 位密码子处两个异亮氨酸突变为 1 个异亮氨酸（图7-8）；外显子 53 无突变（结果未显示）。
     
     
    结论
     
    斯贝福（北京）生物技术有限公司 SCID Beige 小鼠的基因编辑类型为：Lyst 基因外显子 52 有 3bp 缺失（CAT），导致该蛋白 3740 位和 3741 位密码子处两个异亮氨酸突变为 1 个异亮氨酸；Prkdc 基因 85 号外显子单核苷酸改变（T 突变为 A）。
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